Лаа, саван хийх зориулалттай цэвэр Saposhnikovia divaricata тос бөөний сарниулагч эфирийн тос зэгс шатаагч сарниагчид шинэ

Лаа, саван үйлдвэрлэхэд зориулсан цэвэр Saposhnikovia divaricata тос бөөний сарниулагч эфирийн тос зэгс шатаагч сарниулахад зориулсан шинэхэн Онцлох зураг

товч тайлбар:

2.1. SDE бэлтгэх

SD-ийн үндэслэг ишийг Hanherb Co.-аас (Гури, Солонгос) хатаасан өвсөөр худалдаж авсан. Ургамлын материалыг Солонгосын Дорно дахины Анагаах Ухааны Хүрээлэн (KIOM)-ийн доктор Го-Я Чой ангилал зүйн хувьд баталгаажуулсан. Ваучерын дээжийг (2014 оны SDE-6 дугаартай) Солонгосын стандарт ургамлын нөөцийн гербариумд хадгалсан. SD-ийн хатаасан үндэслэг ишийг (320 гр) 70% этилийн спиртээр (2 цагийн рефлюкс) хоёр удаа гаргаж аваад дараа нь хандыг бууруулсан даралтын дор баяжуулсан. Декоциний шүүж, лиофилж, 4 хэмд хадгална. Эхлэл түүхий эдээс хатаасан хандны гарц 48.13% (w/w) байв.

2.2. Өндөр үзүүлэлттэй шингэний хроматографийн (HPLC) тоон шинжилгээ

Хроматографийн шинжилгээг HPLC систем (Waters Co., Milford, MA, USA) болон фотодиодын массив илрүүлэгчээр хийсэн. SDE-ийн HPLC шинжилгээнд зориулж анхдагчO-Глюкозилцимифугин стандартыг Солонгосын Уламжлалт Анагаах Ухааны Үйлдвэрийг Дэмжих Институтээс (Кёнсан, Солонгос) худалдаж авсан, мөнсек-О-глюкозилхамаудол ба 4′-O-β-D-глюкозил-5-O-Метилвисамминолыг манай лабораторид тусгаарлаж, спектрийн шинжилгээгээр, ялангуяа NMR болон MS-ээр тодорхойлсон.

SDE дээжийг (0.1 мг) 70% этанолд (10 мл) уусгасан. Хроматографийн тусгаарлалтыг XSelect HSS T3 C18 багана (4.6 × 250 мм, 5) ашиглан гүйцэтгэсэн.μm, Waters Co., Milford, MA, АНУ). Хөдөлгөөнт фаз нь 1.0 мл/мин урсгалын хурдтай ацетонитрил (A) ба 0.1% цууны хүчил (B) уснаас бүрдэнэ. Олон алхамт градиент программыг дараах байдлаар ашигласан: 5% A (0 мин), 5-20% A (0-10 мин), 20% A (10-23 мин), 20-65% A (23-40 мин). ). Илрүүлэх долгионы уртыг 210-400 нм-т сканнердаж, 254 нм-т бүртгэсэн. Тарилгын хэмжээ 10.0 байвμL. Гурван хромоныг тодорхойлох стандарт уусмалыг эцсийн концентраци 7.781 мг/мл (prim-O-глюкозилцимифугин), 31.125 мг/мл (4′-)O-β-D-глюкозил-5-O-метилвисамминол), 31.125 мг/мл (сек-О-глюкозилхамаудол) метанолд хийж 40С-т хадгална.

2.3. Үрэвслийн эсрэг үйл ажиллагааны үнэлгээIn Vitro

2.3.1. Эсийн өсгөвөр ба дээжийн эмчилгээ

RAW 264.7 эсийг American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA, USA)-аас авч, 1% антибиотик, 5.5% FBS агуулсан DMEM орчинд ургуулсан. Эсийг 5% CO2-ийн чийгшүүлсэн уур амьсгалд 37°С-д өсгөвөрлөсөн. Эсийг идэвхжүүлэхийн тулд орчинг шинэхэн DMEM орчин, липополисахарид (LPS, Sigma-Aldrich Chemical Co., St. Louis, MO, USA) 1-ээр сольсон.μSDE (200 эсвэл 400) байгаа эсвэл байхгүй үед г/мл нэмсэнμг/мл) нэмэлт 24 цагийн турш.

2.3.2. Азотын исэл (NO), простагландин E2 (PGE2), хавдрын үхжилийн хүчин зүйлийг тодорхойлох.α(TNF-α), болон Интерлейкин-6 (ИЛ-6) үйлдвэрлэл

Эсүүдийг SDE-ээр эмчилж, 24 цагийн турш LPS-ээр өдөөдөг. Өмнөх судалгааны дагуу Griess урвалж ашиглан нитритийг хэмжих замаар NO-ийн үйлдвэрлэлд дүн шинжилгээ хийсэн.12]. Үрэвслийн цитокин PGE2, TNF-ийн шүүрэлα, мөн IL-6-г үйлдвэрлэгчийн зааврын дагуу ELISA иж бүрдэл (R&D систем) ашиглан тодорхойлсон. SDE-ийн NO болон цитокины үйлдвэрлэлд үзүүлэх нөлөөг Wallac EnVision ашиглан 540 нм эсвэл 450 нм-д тодорхойлсон.™бичил хавтан уншигч (PerkinElmer).

2.4. Антиостеоартритийн үйл ажиллагааны үнэлгээIn Vivo

2.4.1. Амьтад

Sprague-Dawley эрэгчин хархыг (7 долоо хоногтой) Samtako Inc.-ээс (Осан, Солонгос) худалдан авч, 12 цагийн гэрэл/харанхуйн мөчлөгтэй, хяналттай нөхцөлд хадгалсан.°C бачийгшил %. Хархнууд лабораторийн хоол, усаар хангагдсанad libitum. Туршилтын бүх процедурыг Үндэсний Эрүүл Мэндийн Хүрээлэнгийн (NIH) удирдамжийн дагуу хийж, Дэжон их сургуулийн (Бүгд Найрамдах Солонгос улсын Тэжон) Амьтны арчилгаа, ашиглалтын хорооноос баталсан.

2.4.2. Харханд MIA-тай OA-ийн индукц

Судалгааг эхлэхээс өмнө амьтдыг санамсаргүй байдлаар ангилж, эмчилгээний бүлгүүдэд хуваарилсан (бүлэг бүрт). MIA уусмал (3 мг/50μL 0.9% давсны уусмал) баруун өвдөгний үений хөндийд кетамин ба ксилазиныг хольсон мэдээ алдуулалтын дор шууд тарьсан. Хархуудыг санамсаргүй байдлаар дөрвөн бүлэгт хуваасан: (1) ХАА-ын тарилгагүй давсны бүлэг, (2) ХАЯ-ны тарилгатай MIA бүлэг, (3) SDE-ээр эмчилсэн бүлэг (200 мг/кг), MIA тарилгатай, (4) ) indomethacin- (IM-) эмчилсэн бүлэг (2 мг/кг) МИА тарилгатай. Хархуудад 4 долоо хоногийн турш MIA тарилга хийхээс 1 долоо хоногийн өмнө SDE ба IM-ийг амаар өгсөн. Энэ судалгаанд ашигласан SDE болон IM-ийн тунг өмнөх судалгаанд ашигласан тунг үндэслэнэ [10,13,14].

2.4.3. Арын хөлийн жингийн хуваарилалтын хэмжилт

OA-ийн индукцийн дараа хойд сарвууны жинг даах чадварын анхны тэнцвэр алдагдсан. Жин даах хүлцлийн өөрчлөлтийг үнэлэхийн тулд чадваргүй байдлын шалгагч (Linton instrumentation, Norfolk, UK) ашигласан. Хархыг хэмжих камерт болгоомжтой байрлуулсан. Хойд мөчний ачааллыг даах хүчийг 3 секундын хугацаанд дунджаар тооцсон. Жингийн хуваарилалтын харьцааг дараах тэгшитгэлээр тооцоолсон: [баруун хойд мөчний жин/(баруун хойд мөчний жин + зүүн хойд мөчний жин)] × 100 [15].

2.4.4. Сийвэн дэх цитокины түвшинг хэмжих

Цусны дээжийг 40С-т 10 минутын турш 1500 г-т центрифуг; Дараа нь ийлдсийг цуглуулж, хэрэглэх хүртэл -70 хэмд хадгална. IL-1-ийн түвшинβ, IL-6, TNF-α, болон ийлдэс дэх PGE2-ийг үйлдвэрлэгчийн зааврын дагуу R&D Systems (Миннеаполис, MN, АНУ)-ын ELISA иж бүрдэл ашиглан хэмжсэн.

2.4.5. Бодит цагийн тоон RT-ПГУ-ын шинжилгээ

Өвдөгний үений эдээс нийт РНХ-ийг TRI урвалж® (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) ашиглан гаргаж авч, урвуугаар cDNA руу хуулж, SYBR ногоон (Applied Biosystems) бүхий TM One Step RT ПГУ-ын иж бүрдэл ашиглан ПГУ-аар олшруулсан. , Гранд арал, Нью-Йорк, АНУ). Бодит цагийн тоон ПГУ-ыг Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR системийг (Applied Biosystems, Grand Island, NY, USA) ашиглан хийсэн. Праймерын дараалал ба датчикийн дарааллыг Хүснэгтэнд үзүүлэв1. Үйлдвэрлэгчийн зааврын дагуу (Applied Biosystems, Foster, CA, USA) ДНХ полимераз агуулсан TaqMan® Universal ПГУ-ын мастер хольцоор дээжийн cDNA-ийн хэсгүүд болон ижил хэмжээний GAPDH cDNA-г олшруулсан. ПГУ-ын нөхцөл нь 40 циклийн турш 50 ° C-д 2 минут, 94 ° C-д 10 минут, 95 ° C-д 15 секунд, 60 ° C-д 1 минут байв. Зорилтот генийн концентрацийг үйлдвэрлэгчийн зааврын дагуу харьцуулсан Ct (олшруулах график ба босго хоорондын хөндлөн цэг дээрх босго мөчлөгийн тоо) аргыг ашиглан тодорхойлсон.

FOB үнэ:АНУ-ын $ 0.5 - 9,999 / Хэсэг

Хамгийн бага захиалгын тоо:100 ширхэг / ширхэг

Нийлүүлэлтийн чадвар:Сард 10000 ширхэг

Бидэн рүү имэйл илгээнэ үү

Бүтээгдэхүүний дэлгэрэнгүй

Бүтээгдэхүүний шошго

Остеоартрит (ОА) нь яс-булчингийн тогтолцооны хамгийн түгээмэл өвчин бөгөөд ахмад настнуудад хамгийн түгээмэл тохиолддог үе мөчний дегенератив өвчин юм.1]. OA нь хэсэгчлэн гэмтэл, мөгөөрсний бүтэц, үйл ажиллагаа алдагдах, үрэвслийн эсрэг болон үрэвслийн эсрэг замын зохицуулалт алдагдах зэргээс үүдэлтэй эмгэг юм.2,3]. Энэ нь голчлон үе мөчний мөгөөрс, үе мөчний доорх ясанд нөлөөлж, үе мөчний дутагдалд хүргэдэг ба жин даах, алхах, зогсох зэрэгт өвдөлт үүсгэдэг.4].

Мөгөөрсний эдийг устгасны дараа нөхөн сэргээхэд маш хэцүү тул OA-ийг эмчлэх арга байхгүй.5]. Эмчилгээний зорилго нь өвдөлтийг намдаах, үе мөчний хөдөлгөөнийг хадгалах, сайжруулах, үе мөчний хүчийг нэмэгдүүлэх, өвчний хөгжлийн бэрхшээлийг багасгахад оршино. OA-ийн фармакологийн эмчилгээ нь өвчтөний үе мөчний үйл ажиллагаа, амьдралын чанарыг нэмэгдүүлэхийн тулд өвдөлтийг багасгах зорилготой. Хэдийгээр мөгөөрсний эвдрэл нь OA-ийн гол үйл явдал боловч коллагены задрал нь үрэвсэлтэй холбоотой OA-ийн эргэлт буцалтгүй явцыг тодорхойлдог үндсэн үзэгдэл юм.6,7]. Үрэвслийн эсрэг болон хондропротекторын үйл ажиллагаа бүхий эмчилгээ нь OA өвчтөнүүдийн өвдөлтийг намдааж, матрицын бүрэн бүтэн байдлыг хадгалах болно.

Тиймээс үрэвслийг багасгах нь ОА-ийн эмчилгээнд ашигтай байх болно. Сүүлийн үеийн судалгаагаар үе мөчний эд эстэй харьцах замаар хондроцитийн үрэвслийг намдааж, мөгөөрсний цаашдын эвдрэлийг бууруулж, улмаар үе мөчний өвдөлтийг намдааж, өвчлөлийн хөгжилд ургамлын гаралтай нөөцийг хамгаалах үүргийг санал болгож байна.8].

-ийн үндэсSaposhnikovia divaricataSchischkin (Umbelliferae) нь Солонгос, Хятадад толгой өвдөх, өвдөх, үрэвсэл, үе мөчний өвчнийг эмчлэхэд уламжлалт анагаах ухаанд өргөн хэрэглэгддэг.9,10]. Төрөл бүрийн фармакологийн нөлөөSaposhnikovia divaricata(SD) нь үрэвслийн эсрэг, өвдөлт намдаах, antipyretic болон үе мөчний эсрэг шинж чанартай байдаг [9,11]. Сүүлийн үеийн судалгаагаар SD хромон ханд нь коллагенаар өдөөгдсөн артритын хулганы загварт ревматоид артритын эсрэг үр нөлөөтэй болохыг харуулсан.10]; Гэсэн хэдий ч үрэвслийн эсрэг болон үе мөчний үрэвслийн эсрэг үйл ажиллагааг дэмжих талаар цөөн тооны судалгаа хийсэнSaposhnikovia divaricataханд (SDE).

Тиймээс энэхүү судалгаагаар SD-ийн 70% этилийн спиртийн хандны үрэвслийн эсрэг болон ясны үений үрэвслийн эсрэг үйл ажиллагааг судалсан. Эхлээд SDE-ийн үрэвслийн эсрэг үр нөлөөг үнэлэвin vitroLPS-ээр үүсгэгдсэн RAW 264.7 эсүүдэд. Дараа нь SDE-ийн остеоартритын эсрэг үр нөлөөг мононатрийн иодоацетатын (MIA-) өдөөгдсөн OA-ийн хархны загварт жингийн хуваарилалт, үе мөчний мөгөөрсний доройтол, үрэвслийн хариу урвалыг үнэлэх замаар хэмжсэн.