Лаа болон саван хийхэд зориулсан цэвэр Сапошниковия дивариката тос, бөөний диффузорын эфирийн тос, зэгс шарагч диффузоруудад зориулсан шинэ

товч тайлбар:

 

2.1. SDE-г бэлтгэх

SD-ийн үндэслэг ишийг хатаасан ургамал болгон Hanherb Co. (Guri, Солонгос)-оос худалдаж авсан. Ургамлын материалыг ангиллын хувьд Солонгосын Дорно дахины анагаах ухааны хүрээлэнгийн (KIOM) доктор Го-Я Чой баталгаажуулсан. Ваучерын дээжийг (2014 SDE-6 дугаартай) Солонгосын Стандарт Ургамлын Нөөцийн Herbarium-д хадгалсан. SD-ийн хатаасан үндэслэг ишийг (320 гр) 70% этанолоор хоёр удаа (2 цагийн рефлюксээр) гаргаж аваад, дараа нь багасгасан даралтаар баяжуулсан. Декоциний шүүж, лиофилизаци хийж, 4°C-д хадгалсан. Түүхий эхлэлийн материалаас хатаасан хандны гарц 48.13% (w/w) байв.

 

2.2. Тоон өндөр хүчин чадалтай шингэний хроматографийн (HPLC) шинжилгээ

Хроматографийн шинжилгээг HPLC систем (Уотерс Ко., Милфорд, MA, АНУ) болон фотодиодын массив илрүүлэгч ашиглан хийсэн. SDE-ийн HPLC шинжилгээний хувьд, үндсэнO-глюкозилцимифугин стандартыг Солонгосын Уламжлалт Анагаах Ухааны Үйлдвэрлэлийг Дэмжих Хүрээлэнгээс (Кёнсан, Солонгос) худалдан авсан бөгөөдсекунд-O-глюкозилхамаудол ба 4′-O-β-D-глюкозил-5-O-метилвисамминолыг манай лабораторид ялгаж, спектрийн шинжилгээгээр, голчлон NMR болон MS-ээр тодорхойлсон.

SDE дээжийг (0.1 мг) 70% этанолд (10 мл) уусгасан. Хроматографийн ялгалтыг XSelect HSS T3 C18 багана (4.6 × 250 мм, 5) ашиглан гүйцэтгэсэн.μм, Уотерс Ко., Милфорд, MA, АНУ). Хөдөлгөөнт фаз нь ацетонитрил (A) болон 0.1% цууны хүчил (B)-ийг 1.0 мл/мин урсгалын хурдтайгаар агуулна. Олон шатлалт градиент програмыг дараах байдлаар ашигласан: 5% A (0 мин), 5–20% A (0–10 мин), 20% A (10–23 мин), болон 20–65% A (23–40 мин). Илрүүлэх долгионы уртыг 210–400 нм-д сканнердаж, 254 нм-д бүртгэсэн. Тарилгын хэмжээ 10.0 байв.μL. Гурван хромоныг тодорхойлох стандарт уусмалыг 7.781 мг/мл (прим-) эцсийн концентрацид бэлтгэсэн.O-глюкозилцимифугин), 31.125 мг/мл (4′-O-β-D-глюкозил-5-O-метилвисамминол), ба 31.125 мг/мл (секунд-O-глюкозилгамаудол)-ийг метанолд хийж, 4°C-д хадгална.

2.3. Үрэвслийн эсрэг үйл ажиллагааны үнэлгээIn Vitro

2.3.1. Эсийн өсгөвөр ба дээжийн боловсруулалт

RAW 264.7 эсийг Америкийн төрлийн өсгөврийн цуглуулгаас (ATCC, Manassas, VA, АНУ) авч, 1% антибиотик болон 5.5% FBS агуулсан DMEM орчинд ургуулсан. Эсийг 37°C-д 5% CO2 чийглэг агаар мандалд инкубацалсан. Эсийг идэвхжүүлэхийн тулд орчныг шинэ DMEM орчин, 1-д липополисахарид (LPS, Sigma-Aldrich Chemical Co., St. Louis, MO, USA)-аар сольсон.μSDE байгаа эсэхээс үл хамааран г/мл нэмсэн (200 эсвэл 400μг/мл) нэмэлт 24 цагийн турш байлгана.

2.3.2. Азотын исэл (NO), простагландин E2 (PGE2), хавдрын үхжилийн хүчин зүйлийг тодорхойлохα(TNF-α), болон Интерлейкин-6 (IL-6) үйлдвэрлэл

Эсүүдийг SDE-ээр боловсруулж, 24 цагийн турш LPS-ээр өдөөсөн. Өмнөх судалгааны дагуу Грисс урвалж ашиглан нитритийг хэмжих замаар NO үйлдвэрлэлийг шинжилсэн [1].12Үрэвслийн цитокинууд болох PGE2, TNF--ийн шүүрэлα, мөн IL-6-г үйлдвэрлэгчийн зааврын дагуу ELISA иж бүрдэл (R&D систем) ашиглан тодорхойлсон. SDE-ийн NO болон цитокины үйлдвэрлэлд үзүүлэх нөлөөг Wallac EnVision ашиглан 540 нм эсвэл 450 нм-д тодорхойлсон.™микро хавтан уншигч (PerkinElmer).

2.4. Артрит өвчний эсрэг үйл ажиллагааны үнэлгээАмьд орчинд

2.4.1. Амьтад

Эр Спрэг-Доули хархнуудыг (7 долоо хоногтой) Samtako Inc. (Осан, Солонгос)-оос худалдан авч, 12 цагийн гэрэл/харанхуй мөчлөгтэй хяналттай нөхцөлд хадгалсан.°C ба% чийгшил. Хархнуудад лабораторийн хоол хүнс, усаар хангасан.хүссэнээрээБүх туршилтын журмыг Үндэсний Эрүүл Мэндийн Хүрээлэнгийн (NIH) удирдамжийн дагуу гүйцэтгэсэн бөгөөд Тэжон их сургуулийн (Тэжон, Бүгд Найрамдах Солонгос) Амьтныг арчлах, ашиглах хорооноос баталсан.

2.4.2. Харханд MIA-тай хамт OA-г өдөөх

Судалгааг эхлүүлэхийн өмнө амьтдыг санамсаргүй байдлаар сонгож, эмчилгээний бүлгүүдэд хуваарилсан (бүлэг тус бүрт). MIA уусмал (3 мг/50μ0.9% давсны уусмал (л)-ийг кетамин ба ксилазин холимогоор өдөөгдсөн мэдээ алдуулалтын дор баруун өвдөгний үений доторх зайд шууд тарьсан. Хархнуудыг санамсаргүй байдлаар дөрвөн бүлэгт хуваасан: (1) MIA тарилга хийгээгүй давсны бүлэг, (2) MIA тарилга хийсэн MIA бүлэг, (3) SDE-ээр эмчилсэн бүлэг (200 мг/кг) MIA тарилга хийсэн, (4) индометацин- (IM-)-ээр эмчилсэн бүлэг (2 мг/кг) MIA тарилга хийсэн. Хархнуудад MIA тарилга хийхээс 1 долоо хоногийн өмнө SDE болон IM-ээр 4 долоо хоногийн турш амаар өгсөн. Энэхүү судалгаанд ашигласан SDE болон IM-ийн тун нь өмнөх судалгаануудад ашигласан тунг үндэслэн гаргасан [10,13,14].

2.4.3. Хойд сарвууны жин даацын тархалтын хэмжилт

ОА-г өдөөсний дараа хойд сарвууны жин даах чадварын анхны тэнцвэр алдагдсан. Жин даах тэсвэрлэлтийн өөрчлөлтийг үнэлэхийн тулд хөдөлмөрийн чадвар алдалтын шалгагч (Линтон багаж хэрэгсэл, Норфолк, Их Британи) ашигласан. Хархнуудыг хэмжих камерт болгоомжтой байрлуулсан. Хойд мөчний жин даах хүчийг 3 секундын хугацаанд дунджаар тооцоолсон. Жингийн тархалтын харьцааг дараах тэгшитгэлээр тооцоолсон: [баруун хойд мөчний жин/(баруун хойд мөчний жин + зүүн хойд мөчний жин)] × 100 [15].

2.4.4. Сийвэн дэх цитокины түвшинг хэмжих нь

Цусны дээжийг 1500 г-д 4°C-д 10 минутын турш центрифугээр ялгаж, дараа нь ийлдсийг цуглуулж, хэрэглэх хүртэл -70°C-д хадгалсан. IL-1-ийн түвшинβ, IL-6, TNF-α, болон сийвэн дэх PGE2-ийг үйлдвэрлэгчийн зааврын дагуу R&D Systems (Миннеаполис, Миннесота, АНУ)-ын ELISA иж бүрдлийг ашиглан хэмжсэн.

2.4.5. Бодит цагийн тоон RT-PCR шинжилгээ

Нийт РНХ-г өвдөгний үений эдээс TRI reagent® (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) ашиглан гаргаж авч, кДНХ руу урвуу транскрипци хийж, SYBR ногоон өнгөтэй TM One Step RT PCR хэрэгсэл (Applied Biosystems, Grand Island, NY, USA) ашиглан PCR-ээр олшруулсан. Бодит цагийн тоон PCR-г Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR систем (Applied Biosystems, Grand Island, NY, USA) ашиглан гүйцэтгэсэн. Праймерын дараалал болон датчикийн дарааллыг Хүснэгтэд үзүүлэв.1Дээжийн кДНХ-ийн аликвот болон тэнцүү хэмжээний GAPDH кДНХ-г үйлдвэрлэгчийн зааврын дагуу ДНХ полимераза агуулсан TaqMan® Universal PCR мастер хольцоор олшруулсан (Applied Biosystems, Foster, CA, USA). PCR-ийн нөхцөл нь 50°C-д 2 минут, 94°C-д 10 минут, 95°C-д 15 секунд, 60°C-д 1 минут бөгөөд 40 мөчлөгт зориулагдсан. Бай генийн концентрацийг үйлдвэрлэгчийн зааврын дагуу харьцуулсан Ct (олшруулалтын график ба босго хоорондох хөндлөн цэг дээрх босго мөчлөгийн тоо) аргыг ашиглан тодорхойлсон.

FOB үнэ:АНУ $0.5 - 9,999 / ширхэг

Хамгийн бага захиалгын тоо хэмжээ:100 ширхэг/ширхэг

Нийлүүлэлтийн чадвар:Сард 10000 ширхэг/ширхэг